人生就是博-尊龙凯时的本试剂盒专用于科学研究,严禁用于医学诊断。本文介绍人铁蛋白(FE)的ELISA试剂盒检测原理。
检测原理
该试剂盒采用双抗体一步夹心法的酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预先包被了adropin(AD)抗体的微孔中,依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体。经过温育后,充分洗涤,使用底物TMB进行显色。TMB在过氧化物酶的作用下转变为蓝色,随后在酸性环境下转化为最终的黄色。样品中的adropin(AD)浓度与颜色深浅呈正相关。最后在450nm波长下,通过酶标仪测定吸光度(OD值),从而计算样本浓度。
样品收集与处理方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,避免在操作过程中刺激细胞。收集血液后,进行3000转离心10分钟,以迅速分离血清和红细胞。
2. 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素进行抗凝处理。3000转离心30分钟,取上清。
3. 细胞上清液:进行3000转离心10分钟以去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织与适量生理盐水混合,捣碎后进行3000转离心10分钟,取上清。
5. 保存:样本若未能及时检测,应按单次用量分装并冷冻保存于-20℃,避免重复冻融。在室温下解冻时,确保样品彻底均匀。
操作注意事项
在使用本试剂盒时,请注意一些操作细节。标准品(S0-S5)的浓度依次为:0、25、50、100、200、400pg/mL。
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:将蒸馏水按照1:20进行稀释,即将1份的20×洗涤缓冲液与19份的蒸馏水混合。
洗板方法
在实验过程中,需严格遵循洗板步骤,以确保最终的结果准确可靠。
结果判断
为判断结果,需绘制标准曲线:在Excel中设定标准品浓度为横坐标,对应的OD值为纵坐标,绘制出线性回归曲线。根据该曲线方程计算各样本的浓度值。
请注意,本试剂盒的性能存在免责声明。在使用时,遵循相应的操作规范,以保证实验结果的准确性和可靠性。