人生就是博-尊龙凯时 作为生物医疗领域的专业品牌，提供高效的哺乳动物蛋白提取试剂盒，助力科研人员提升实验效率。该试剂盒包含以下成分：

试剂盒组成

- 5X Buffer: 10 ml
- 5X NaCl: 10 ml
- 5X SDS: 10 ml
- 5X DOC: 10 ml
- 5X NP-40: 10 ml
- 20X PBS: 10 ml
- 蛋白酶抑制剂混合物: 0.5 ml

本试剂盒可在常温保存，唯独蛋白酶抑制剂混合物需存放于-20°C，保质期为24个月。

提取步骤

1. 准备细胞裂解缓冲液

按照5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40以1:1:1:1:1（v/v）的比例配制细胞裂解缓冲液。使用1 ml的细胞裂解缓冲液可提取106~107个细胞或5~20 mg组织中的蛋白质。使用前需加入10 µl的蛋白酶抑制剂混合物。

2. 洗涤细胞或组织

a. 对于贴壁细胞：首先去除生长培养基，用PBS缓冲液洗涤细胞两次。然后加入细胞裂解缓冲液（10^6~10^7个细胞/ml），将细胞置于冰袋中，在摇床上孵育30分钟，并多次重悬细胞。最后，将细胞刮掉并收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：在700 x g下离心5分钟，弃去上清液。用PBS重悬并洗涤细胞两次，再在4°C离心去除上清液。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（10^6~10^7个细胞/ml），并置于冰袋中孵育30分钟。

c. 对于组织：将组织切成小块，用PBS洗涤两次。然后加入细胞裂解缓冲液（5~20 mg组织/ml），转移至预冷的微量匀浆器中，在冰上均匀化组织30~50次。注意均质过程对靶蛋白的功能完整性至关重要。

3. 离心处理

在4°C下，以12,000 x g离心10分钟以沉淀细胞碎片，或进行高速离心（100,000 x g离心45分钟）以制备蛋白质溶液。

4. 收集上清液

将含蛋白质的上清液转移至冷冻管中，可在冰上保存以便立即使用，或将蛋白质溶液存放于-70°C以备后用。人生就是博-尊龙凯时，为您的科研之路提供强有力的支持。